MicroRNA-96对人视网膜色素上皮细胞增殖与迁移的影响

摘要：

目的：:探讨MicroRNA-96（miR-96）对人视网膜色素上皮（RPE）细胞增殖和迁移的影响。方法：:实验研究。通过RNA原位杂交检测人胚胎眼（20周）石蜡切片中RPE层miR-96的表达情况。将miR-96和随机序列寡核苷酸链[阴性对照（NC）]通过阳离子脂质体介导转染人眼RPE细胞，采用细胞增殖实验（MTS）、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移能力。通过生物信息学及Western blot法确定miR-96作用的靶基因。应用Western blot检测miR-96对细胞增殖迁移相关信号通路蛋白（Akt、ERK）及细胞周期相关蛋白（p-Cdc2、CyclinD2、p-Rb）表达的影响。组间数据比较采用独立样本
t检验。
结果：:miR-96在人眼RPE细胞中有表达。MTS结果显示，转染NC、miR-96后，人眼RPE细胞的相对增殖速率分别为100%、74%±2%，差异有统计学意义（
t=42.174，
P=0.002）。流式细胞术检测结果显示，转染miR-96后阻滞在G1期的RPE细胞明显多于转染NC后，且差异有统计学意义（
t=-18.444，
P=0.003）。Transwell实验结果显示，与转染NC相比，转染miR-96能显著抑制RPE细胞的迁移，差异具有统计学意义（
t=6.754，
P=0.002）。进而，明确了
MITF是miR-96作用的靶基因。Western blot检测结果显示，转染miR-96后细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb（
t=11.211，
P=0.002）、p-Cdc2（
t=9.133，
P=0.003）、CyclinD2（
t=7.542，
P=0.005）以及迁移相关信号通路蛋白p-ERK（
t=16.699，
P<0.001）、p-Akt（
t=23.552，
P<0.001）的表达水平均降低。
结论：:miR-96通过作用于靶基因
MITF，调控细胞周期和迁移相关蛋白的表达从而抑制人RPE细胞的增殖和迁移。

关键词：视网膜色素上皮、microRNA-96、细胞增殖、细胞迁移、MITF

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资助基金：浙江省自然科学基金LQ17H120009，LQ15H160014;Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of China GrantLQ17H120009, LQ15H160014

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：184-190