人TSPAN12蛋白大胞外片段的可溶表达和纯化

摘要：

目的:构建人源四次跨膜超家族蛋白12大胞外片段(TSPAN12-LEL)的原核表达质粒,诱导表达和纯化后获得可溶的重组蛋白.方法:实验研究.首先将目的基因克隆至pMa1-c2x载体上,再经PCR扩增、酶切、连接,将带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白编码序列克隆至pETDuet-1载体的第一个多克隆位点,同时将大肠杆菌的DsbC基因克隆至pETDuet-1载体的第2个多克隆位点,与重组蛋白共表达,促进二硫键的正确形成.将重组质粒转化至OrigamiB (DE3)菌株中,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导表达,经交联直链淀粉树脂亲和层析和阴离子交换层析纯化重组蛋白.结果:成功构建重组表达质粒pETDuet-1-MBP-TSPAN12 LEL-DsbC,诱导表达后在蛋白上清中得到大量带MBP标签的融合蛋白(MBP-TSPAN12 LEL),经SDS-PAGE检测该融合蛋白分子量约为60 kD,与理论大小相符,经亲和层析和阴离子交换层析后能获得大量、高纯度可溶的重组蛋白.结论:经过优化,与DsbC蛋白共表达时,带MBP标签的TSPAN12蛋白大胞外片段可以实现在大肠杆菌中可溶表达.

关键词：人源四次跨膜超家族蛋白12、麦芽糖结合蛋白、原核表达、可溶蛋白、纯化

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分类号：TQ4;X7

资助基金：国家自然科学基金81430008,81790643;电子科技大学附属医院四川省人民医院青年人才基金2016QN01Natural Science Foundation of China81430008,81790643;Young Scholars foundation of Sichuan Provincial People's Hospital2016QN01

在线出版日期：2020-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：881-887