全细胞膜片钳结合单细胞RT-PCR技术在NMDA诱导的小鼠青光眼模型视网膜双极细胞G蛋白通路研究中的应用

摘要：

目的:介绍一种视网膜全细胞膜片钳联合单细胞逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术在视网膜单细胞信号成分分析中的应用,并研究N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对ON型双极细胞中G蛋白相关mRNA表达的影响.方法:实验研究.3~5周龄C57BL/6J小鼠20只随机分为2组,每组各10只,分别玻璃体腔注射3μl NMDA(30 nmol/L)构建青光眼模型,3μl PBS(10 nmol/L)作为对照组,24 h后取视网膜,膜片钳下钳取单个ON型双极细胞,并做RT-PCR观察几种目的mRNA的表达差异.2组间各参数比较采用Mann-Whitney检验.结果:RT-PCR结果显示蛋白激酶Cα亚基(PKCα)、瞬时感受电位离子通道1(TRPM1)、G蛋白α亚单位(Gαo)的表达在NMDA青光眼模型构建后分别为0.536±0.339、0.337±0.271、4.36±1.83,构建前后差异有统计学意义(U=0,P=0.001;U=0,P=0.002;U=36,P=0.002).结论:NMDA诱导的青光眼模型可影响视网膜ON型双极细胞G蛋白耦联通道的信号传导.

关键词：膜片钳、单细胞逆转录聚合酶链式反应、视网膜双极细胞、N-甲基-D-天冬氨酸、G蛋白、小鼠

所属期刊栏目：19

分类号：R77;R98

资助基金：国家自然科学基金面上项目81470628、81270998;湖北省自然科学基金杰出青年项目2014CFA019;湖北省卫计委青年人才项目WJ2015Q014 This study was funded by National Natural Science Fund of China81470628, 81270998;Hubei Province Natural Science Fund Preeminent Youth Project2014CFA019;Hubei Provincial Health Commission Excellent Scientist ProjectWJ2015Q014

在线出版日期：2017-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：462-467