靶向血管内皮生长因子的RNA干扰抑制氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管生成的研究

摘要：

目的 探讨玻璃体腔注射靶向血管内皮生长因子(VEGF)的RNA干扰慢病毒抑制氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管生成的作用及其机制.方法 实验研究.构建4对针对靶基因小鼠VEGF的siRNA干扰载体,筛选并进行慢病毒包装.60只C57BL/6J小鼠分成4组(每组15只):正常对照组,OIR模型组,OIR+空载体组,OIR+VEGF-RNA干扰组.OIR+空载体组和OIR+VEGF-RNA干扰慢病毒组的小鼠在生后第5天玻璃体腔注射相应的1μl的7.5×107空载体慢病毒和VEGF-RNA干扰慢病毒.后3组小鼠在生后第7天建立OIR模型.第17天时FITC-Dextran灌注视网膜铺片观察4组小鼠视网膜血管形态及面积变化,视网膜铺片免疫荧光染色检测紧密连接蛋白Claudin-5和Occludin的分布变化,Western blot检测VEGF、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、酪氨酸蛋白激酶SRC、磷酸化细胞外信号调节激酶( p-ERK)蛋白表达量的变化.数据采用单因素方差分析进行比较.结果 FITC-Dextran灌注视网膜铺片显示正常组视网膜血管分布呈均匀网状；RNA干扰组新生血管面积(0.271 399 mm2)明显较OIR模型组(1.212 782 mm2)、空载体组(1.152 504 mm2)少(F=449.924,P＜0.01).OIR模型组和空载体组间差异无统计学意义,其余两两间差异均有统计学意义(P＜0.01).视网膜铺片免疫荧光染色显示紧密连接蛋白Claudin-5和Occludin在RNA干扰组中与正常组相似,呈均匀光滑线性分布,而在OIR模型组、空载体组的分布中断、不均匀,在新生血管团中可见团块状的强荧光；VEGF的RNA干扰组中VEGF、PI3K、酪氨酸蛋白激酶SRC和p-ERK的蛋白表达量较OIR模型和空载体组低.结论 玻璃体腔注射靶向VEGF的RNA干扰慢病毒能有效抑制OIR小鼠模型中VEGF及其下游通路蛋白的表达,从而抑制视网膜新生血管的形成,为临床上早产儿视网膜病变的防治提供了新思路和新途径.

关键词：血管内皮生长因子A、RNA干扰、视网膜新生血管化、视网膜病、早产儿、模型、动物

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分类号：R856.77(航空航天医学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81070711;广州市科技信息化局应用基础资助项目2008J1-C011

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：47-52