腺病毒介导人内皮抑素感染视网膜色素上皮细胞的可行性研究

摘要：

目的 探讨以腺病毒为载体对体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞进行人内皮抑素(human endostatin,hES)感染,获得高效表达hES转基因细胞的可行性.方法 常规培养hRPE细胞,传代至第3～第5代后,应用携带有绿色荧光蛋白(green fluores-cent protein,GFP)的hES重组腺病毒按感染复数30进行感染.培养24 h后,在荧光显微镜下计数培养的hRPE细胞的GFP表达阳性率;用免疫组织化学法观察hES在已感染hRPE细胞中的表达情况;提取hRPE细胞总RNA,采用RT-PCR技术对产物行琼脂糖凝胶电泳;用Western blot法检测感染hRPE细胞培养上清液中hES的表达水平.结果 hES重组腺病毒感染后,hRPE细胞形态正常.感染后24 h,GFP即呈100%表达,弥漫整个胞质;免疫组织化学法观察可见,hRPE细胞浆内呈棕黄色的阳性反应,而在感染空载腺病毒的对照组中细胞胞浆无染色;RT-PCR反应可见,细胞裂解产物中有hES阳性条带;Western blot法检测结果 表明,培养上清液中有hES蛋白的表达.结论 hES重组腺病毒载体能有效感染体外培养的hRPE细胞,并稳定表达hES蛋白.

关键词：视网膜色素、上皮细胞、腺病毒、内皮抑素类、感染

所属期刊栏目：11

分类号：R773.4;R392.11(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金项目30500547;教育部重点项目108178

在线出版日期：2009-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：265-268