早熟砂梨ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要：

以我国南方主栽的早熟砂梨品种‘翠冠’Pyrus pyrifolia‘Cuiguan’为材料，对ISSR技术体系中的模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、退火温度、PCR循环数等7个主要因素进行优化和筛选，建立了适合早熟砂梨的ISSR-PCR反应体系。最终反应体系为20μL体系中10×PCR buffer （不含Mg2+）2μL，模板 DNA浓度60 ng，TaqDNA聚合酶0.75 U，引物浓度1μmol/L，dNTP浓度90μmol/L， Mg2+浓度2.25 mmol/L。扩增程序为：预变性94℃5 m in，变性94℃45 s，退火45 s，72℃延伸1 min，共42个循环，然后72℃再延伸10 min，4℃保存，用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测多态性。

关键词：早熟、砂梨、ISSR、体系优化

分类号：Q943.2(植物学)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金20113515110011;福建省科技计划重点项目2012N0005

在线出版日期：2013-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：91-96