miR-214表达载体构建及其对靶基因β-catenin的调控

摘要：

目的:构建miR-214真核表达载体,验证miR-214对其靶基因β-catenin的调控作用.方法:以基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增包括miR-214前体的基因序列,将其插入表达载体pcDNA3.1(+)获得pcDNA3.1-miR-214真核表达载体.将其转染到A549细胞后,通过实时定量PCR(Real-time PCR)方法对其表达情况进行验证.应用生物信息学预测软件TargetScan、mirBase和PicTar 对miR-214靶基因进行预测,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-214对靶基因β-catenin的3'UTR区的调控作用.通过Western blot方法检测miR-214对β-catenin蛋白表达的影响.结果:成功构建miR-214表达载体pCDNA3.1-miR-214.Real-time PCR结果表明pCDNA3.1-miR-214在A549细胞中能够过表达成熟的miR-214基因.生物信息学预测β-catenin是miR-214的靶基因,并构建融合β-catenin 的3'UTR 区表达质粒pMIR-β-catenin,在此基础上对β-catenin的3'UTR “种子区”进行定点突变.双荧光素酶报告基因分析表明miR-214能够作用于β-catenin的3'UTR.Western blot方法进一步证实β-catenin是miR-214的靶基因.结论:miR-214作用于β-catenin的3'UTR ,可在转录后水平调控β-catenin的表达.

关键词：miR-214、β-catenin、肺癌、载体

分类号：R735.1(肿瘤学)

在线出版日期：2013-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：35-37