压力诱导兔视网膜干细胞向视网膜神经节细胞分化研究

摘要：

目的:探讨压力对与兔视网膜神经节细胞(RGCs)共培养的视网膜干细胞(RSCs)分化的影响。方法:选取SPF级新西兰孕22 d兔，取出胚胎，获取视网膜睫状缘色素上皮组织，培养原代RSCs。选取SPF级新生新西兰大白兔6只，分离视网膜神经上皮层组织，培养原代RGCs。采用巢蛋白(Nestin)抗体免疫荧光染色法、溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)流式细胞术分析、RSCs自发分化细胞免疫荧光检测及流式细胞术分析鉴定体外培养的兔RSCs，采用免疫荧光染色法以Brn3b抗体及Thy1.1抗体鉴定RGCs；将RGCs和RSCs分别放在Transwell的上下层培养，构建共培养体系。分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测0、20、40、60、80 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)压力条件下室RSCs及分化所得细胞的Nestin和Thy1.1 mRNA和蛋白表达变化。结果:体外培养的兔RSCs特异性标志物Nestin抗体染色阳性；BrdU流式细胞术分析结果显示，BrdU阳性细胞占分离RSCs细胞的(92.26±3.28)%；免疫荧光检测结果显示，RSCs分化细胞中，部分细胞Brn3b抗体表达阳性，部分细胞GS抗体表达阳性。流式细胞术双色分析结果显示，Brn3b和GS阳性细胞率分别为(13.00±3.06)%和(31.60±3.67)%。免疫荧光染色结果显示，体外培养的兔RGCs Brn3b抗体及Thy1.1抗体染色阳性。不同压力条件下RSCs及分化所得细胞的Nestin、Thy1.1 mRNA和蛋白相对表达量比较差异均有统计学意义(mRNA：
F＝127.600、137.400，均
P<0.01；蛋白：
F＝82.480、158.700，均
P<0.001)，其中与0 mmHg相比，20、40、60、80 mmHg条件下，Nestin mRNA及蛋白相对表达量降低，Thy1.1 mRNA及蛋白相对表达量增加，差异均有统计学意义(均
P<0.05)。40 mmHg时，Nestin mRNA和蛋白相对表达量最低，Thy1.1 mRNA和蛋白相对表达量最高。
结论:在一定范围内，压力能够促进与RGCs共培养的RSCs分化成视网膜神经节样细胞，压力过大会抑制RSCs的分化。

关键词：视网膜、干细胞、视网膜神经节细胞、压力、细胞分化、青光眼

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资助基金：国家自然科学基金项目81660160;云南省自然科学基金项目2017FB124;云南省卫生健康委员会医学后备人才培养计划项目H-2018023;云南省高层次人才培养支持计划－青年拔尖人才专项项目YNWR-QNBJ-2020-237;云南省眼科疾病防治研究重点实验室项目2017DG008;院士和领军人才培养项目2017HC010;北京市石景山区亢泽峰名医传承工作室项目81660160;中医药传承与创新"百千万"人才工程（岐黄工程）岐黄学者项目2017FB124;National Natural Science Foundation of ChinaH-2018023;Natural Science Foundation Project of Yunnan ProvinceYNWR-QNBJ-2020-237;Health and Wellness Committee Medical Reserve Talents Training Program of Yunnan Province2017DG008;Yunnan Province High-Level Talent Training Support Program-The Young Talent Project2017HC010;Key Laboratory of Yunnan Province for the Prevention and Treatment of Ophthalmology2017IC064;Academician and Leading Talent Training Program;Academician Expert Workstation Project;Construction Program for Inheritance Office of KANG Ze-feng, Famous TCM Experts of Shijingshan District in Beijing;Talent Project for Heritage and Innovation of Traditional Chinese Medicine Qihuang Project Qihuang Scholar

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1134-1140