羊膜对人视网膜色素上皮细胞增生和分化的影响

摘要：

背景 人视网膜色素上皮(RPE)细胞移植治疗视网膜变性性疾病是目前的研究热点之一,许多生物载体可制备RPE细胞单层,但多存在着细胞毒性、稳定性差及免疫反应等问题. 目的 检测羊膜对人RPE细胞增生和分化的影响,探讨其作为人RPE细胞层载体进行移植的可能性. 方法 将RPE细胞系ARPE-19细胞株用含质量分数10％胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养和传代,8～12代细胞用于实验.将传代细胞分为2个组,一组细胞接种于去上皮羊膜作为实验组,另一组细胞直接在培养孔内进行培养作为对照组.分别于接种后24、48、72、96 h行MTT实验,测定RPE细胞的吸光度(A492)值以评估两组细胞在增生能力方面的不同；培养3周后的细胞层行苏木精-伊红染色,检测细胞在不同培养载体上是否存在形态学方面的区别；分别收集同一孔中生长于羊膜和培养板表面的细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测色素上皮衍生因子(PEDF)、钙黏蛋白(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)以及细胞连接相关蛋白的表达情况；同时收集培养3周时的细胞行透射电子显微镜和扫描电子显微镜检查,比较不同载体培养的ARPE-19细胞在超微结构方面的区别.结果 与对照组相比,实验组细胞增生的速度明显变缓,两组细胞增生情况比较差异有统计学意义(F=41.760,P=0.000).苏木精-伊红染色结果显示,同一培养孔内实验组的细胞密度明显低于对照组,说明羊膜对ARPE-19细胞增生的影响不是通过细胞分泌的可溶性因子的作用.RT-PCR结果显示,实验组细胞连接相关蛋白claudin 1、N-cadherin和PEDFmRNA在培养细胞上的表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(t=15.828,P=0.000;t=6.839,P=0.002;t=14.667,P=0.000)；Connexin 43的表达低于对照组,差异有统计学意义(t=3.358,P=0.024).超微结构分析发现羊膜载体上的细胞呈典型的多边形RPE细胞表型,分化现象明显,而普通培养板培养的RPE细胞形态主要呈梭形,细胞层厚薄不均.结论 去上皮羊膜为载体培养的RPE细胞增生速度变慢,但培养的细胞分化程度较高,提示羊膜可作为RPE细胞体外培养的良好载体,用于制备移植所需功能成熟的RPE细胞片层.

关键词：羊膜、视网膜色素上皮细胞、增生、分化

所属期刊栏目：30

分类号：R329-33(人体形态学)

资助基金：山东省自然科学基金JQ200908;山东省自然科学基金青年基金Q2008C02

在线出版日期：2012-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：786-790