外源性α晶状体蛋白作用于视网膜神经节细胞的定位研究

摘要：

背景 视神经损伤后无法有效再生,而近年研究发现,α晶状体蛋白能显著促进视网膜神经节细胞(RGCs)的存活及轴突有效再生,但其分子机制尚不清楚.目的 研究外源性α晶状体蛋白与RGCs的结合部位.方法 从2只2 d龄Long Evans大鼠视网膜中分离并原代培养RGCs,应用thy1.1和cy3抗体荧光染色技术对培养的RGCs进行鉴别并在荧光显微镜下计数RGCs阳性率.对外源性的α晶状体蛋白生物素化后用直接显色法进行鉴定,并用胰岛素实验对其分子伴侣活性进行测定,明确α晶状体蛋白生物素化成功并具有分子伴侣活性后与原代培养的RGCs共孵育,再与荧光标记的亲和素进行反应,在激光共焦显微镜下观察外源性α晶状体与RGCs的结合部位.结果 原代培养的RGCs阳性率为94%;生物素化α晶状体蛋白直接显色法鉴定整体显色强,其A450值随生物素化的α晶状体蛋白的浓度下降而下降,提示α晶状体蛋白生物素化成功;生物素化α晶状体蛋白的分子伴侣活性明显,且生物素化前后活性无明显改变;生物素化α晶状体蛋白与RGCs共孵育及荧光染色后,激光共焦显微镜下与生物素化α晶状体蛋白共孵育的RGCs细胞膜和轴突均可见红色荧光,细胞质和细胞核未见荧光染色.对照组RGCs未见荧光染色.结论 外源性的α晶状体蛋白特异性地结合在RGCs细胞膜上,提示外源性的α晶状体蛋白通过与RGCs细胞膜特异性结合而发挥相应的生物学功能,但其结合方式及作用机制需进一步研究.

关键词：α晶状体蛋白、生物素化、视网膜神经节细胞

所属期刊栏目：29

分类号：R774.01(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金30872833

在线出版日期：2011-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：681-684