利用流式细胞仪分选纯化大鼠视网膜Müller细胞

摘要：

背景 在研究视网膜Müller细胞的病理生理过程中,建立Müller细胞的培养模型、获得高纯度的Müller细胞是基本步骤.目前使用的纯化培养Muller细胞的技术所获得的细胞纯度不够理想.目的 建立一种获得高纯度原代培养视网膜Müller细胞的技术方法.方法取5只新生SD大鼠的视网膜经质量分数0.01%胰蛋白酶消化制备细胞悬液,然后在含质量分数10%胎牛血清的DMEM培养基中进行原代培养,细胞扩增至大于6×105个时收集细胞,无菌条件下用流式细胞仪进行分选,将细胞悬液中体积最大、数量最多的一种细胞分选出来继续培养并传代,应用透射电镜和光学显微镜观察细胞的形态学变化,应用免疫组织化学技术鉴定培养和传代的细胞类型及纯度.结果 原代培养视网膜Müller细胞成功,其中混杂有其他类型的小细胞,生长缓慢,培养3周生长速度加快.用分次贴壁法清除成纤维细胞,经传代去除部分神经元,经流式细胞仪纯化后可获得细胞成分单一、体积最大的一批细胞.透射电镜下细胞内可见丰富的线粒体、高尔基体和大量直径8～10 nm的微丝.培养细胞的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学染色细胞阳性率为100%.结论 利用流式细胞仪对培养的Müller细胞进行分选是可行的,能够获得高纯度的视网膜Müller细胞.

关键词：Müller细胞、细胞培养、流式细胞仪

所属期刊栏目：29

分类号：R774(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金项目30660056;云南省教育厅基金项目2010Y194

在线出版日期：2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：121-124