miR-29b通过靶向调节特异性蛋白1调控糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化的作用
目的 探究miR-29b通过靶向调节特异性蛋白1(SP-1)调控糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化(EMT)的作用机制.方法 体外培养人晶状体上皮细胞(HLE-B3),分为正常组、高糖组、阴性组、miR-29b mimics组和miR-29b mimics+ SP-1组.除正常组细胞外,其余各组细胞于35.5 mmol·L-1 D-葡萄糖环境中培养.阴性组、miR-29b mim-ics组和miR-29b mimics+ SP-1组分别共转染miRNA模拟物scramble和阴性siRNA序列、转染miR-29b模拟物、共转染miR-29b模拟物和SP-1基因序列.采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-29b和SP-1 mRNA表达,采用Transwell法和细胞划痕实验检测各组细胞迁移活性.采用免疫荧光染色和Western blot检测和各组细胞钙黏蛋白(E-Cadherin、N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、SP-1蛋白表达情况.根据生物信息学数据库和双荧光素酶报告基因验证miR-29b和SP-1基因的靶向关系.结果 35.5 mmol·L-1 D-葡萄糖组处理HLE-B324 h,细胞中miR-29b mRNA相对表达量较正常组降低,SP-1 mRNA和蛋白相对表达量均升高(均为P＜0.05).与正常组相比,高糖组细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率增加,E-Cadherin蛋白表达降低,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达升高(均为P＜0.05).而与高糖组和阴性组相比,miR-29b mimics组细胞miR-29b mRNA相对表达量和E-Cadhenn蛋白表达增加,SP-1、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达降低,细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率均减少(均为P＜0.05).miR-29b mimics+SP-1组较miR-29b mimics组细胞中E-Cadhenn蛋白表达降低,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达增加,细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率增加(均为P ＜0.05).经双荧光素酶报告基因验证,转染miR-29b mimics质粒可降低SP1-3'UTR-WT荧光素酶活性(P＜0.05),但不降低SP1-3'UTR-MUT荧光素酶活性(P＞0.05).结论 miR-29b在糖尿病性白内障体外细胞模型中表达下调.上调miR-29b表达可通过靶向SP-1基因参与抑制高糖诱导晶状体上皮细胞EMT的进程.
miR-29b;调节特异性蛋白1;糖尿病;白内障上皮细胞;间质转化
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R776.1(眼科学)
四川省科技厅项目2018SZ0068
2022-01-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1116-1121
