氧化应激诱导视网膜色素上皮细胞中钙蛋白酶激活作用研究
目的 观察一定浓度H2O2氧化应激体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中钙蛋白酶(Calpain)含量及细胞活性改变.方法 常规培养商品化人RPE细胞系ARPE-19作为对照组,培养基内加入终浓度为10μmol·L-1及100μmol·L-1的H2O2作为实验组,培养4h、8h、16 h及32 h进行测定.MTT法测定不同浓度H2O2刺激下RPE细胞不同检测时间点细胞增殖率的变化;Fluo-3/AM、ester钙离子荧光探针标记细胞内钙离子,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测RPE细胞内钙离子荧光值,间接观察钙离子浓度变化.10 μmol·L-1H2O2氧化刺激RPE细胞8h,用Western-Blot法及实时荧光定量PCR法检测细胞内Calpain蛋白及RNA含量的变化.结果 与对照组相比,10 μmol·L-1 H2O2刺激RPE细胞4h、8h、16 h及100 μmol·L-1H2O2刺激RPE细胞4h及8h后增殖率(r值)升高差异均具有显著统计学意义(均为P＜0.01).100μmol·L-1 H2O2刺激16 h及32 h细胞增殖率均较对照组下降(均为P＜0.01).10 μmol·L-1 H2O2刺激RPE细胞8h后胞内钙离子荧光强度(563.27±77.10)U较对照组(170.77±20.11)U显著升高(P＜0.01)、Calpain在mRNA和蛋白水平均较对照组显著升高(均为P＜0.05),而在同时使用Calpain抑制剂SNJ-1945(SNJ)的实验组这些变化可被有效抑制.结论 RPE细胞中钙超载激活Calpain参与H2O2氧化刺激RPE细胞的氧化应激改变.
氧化应激、视网膜色素上皮细胞、钙蛋白酶
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R774(眼科学)
陕西省社会发展科技攻关项目编号:S2015YFSF0342Shaanxi Science and Technology Development Research Project S2015YFSF0342
2018-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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