高压力对角膜内皮细胞损伤微观机制的研究

摘要：

目的 探讨高压力对兔角膜内皮细胞损伤的微观机制.设计实验研究.研究对象仿生培养的兔角膜内皮细胞.方法 将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞(rabbit corneal endothelial cells,RCEC)分为五组:A组30 mmHg压力组,B组压力波动组,将压力设为15～25～20～10 mmHg,每个压力持续6小时,C组50 mmHg压力组,D组正常压力组,E组无压力组.免疫法鉴定原代角膜内皮细胞;流式细胞术检测细胞活性;Western蛋白印迹法检测细胞中蛋白BcL-2和P53表达;RT-PCR检测Fas/FasL的表达;免疫荧光检测细胞胞浆细胞色素C(Cytc)的表达.主要指标兔角膜内皮细胞蛋白BcL-2、p53表达以及Fas/FasL和Cytc的表达.结果 获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染.细胞分别培养24h后,流式细胞术分析发现高压力组细胞存活率明显下降,而受损的细胞大部分处于凋亡状态;Western蛋白印迹法结果显示:在30 mmHg组、50mmHg组和压力波动组中蛋白P53相对表达量(OPTDI P53/OPTDIactin)分别为(0.253±0.014)、(0.670±0.019)、(0.474±0.016),明显高于正常压力组(0.009±0.003)(F=1210,P=0.000);RT-PCR检测各组中各时间段Fas/FasL的表达均为阴性;在高压力组中,免疫荧光检测发现细胞胞浆中Cytc呈阳性表达.结论 高压力对角膜内皮细胞损伤是通过细胞凋亡介导,而压力调控下细胞凋亡途径的启动是角膜内皮细胞Cytc从线粒体释放入胞浆,通过激活凋亡的内源性途径实现.

关键词：超微机制、压力、仿生培养、角膜内皮细胞

所属期刊栏目：27

分类号：R734.2;R392-33;R285.5

资助基金：国家自然科学基金30801263

在线出版日期：2018-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：36-41