慢病毒载体介导过表达和敲低miR-155的AB 8/13细胞株的建立

摘要：

目的 利用慢病毒载体构建稳定过表达miR-155的AB 8/13细胞株(AB 8/13-LV-has-miR-155)和稳定敲低miR-155的AB 8/13细胞株(AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton),为研究miR-155在足细胞焦亡和肾脏疾病中的作用奠定基础.方法 体外培养AB 8/13细胞,使用不同浓度嘌呤霉素刺激AB 8/13细胞48 h,在光学显微镜下观察AB 8/13细胞的死亡情况;使用LV-has-miR-155阴性对照病毒、LV-has-miR-155-5p inhibiton阴性对照病毒分别感染AB 8/13细胞,在荧光显微镜下观察AB 8/13细胞的状态和感染效率;在嘌呤霉素筛选出稳定细胞株后,通过实时荧光定量PCR法检测稳定细胞株的miR-155表达量.结果 在3.5μg/mL及以上浓度的嘌呤霉素作用于AB 8/13细胞48 h后,所有细胞全部死亡.LV-has-miR-155慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80％的最佳条件为在含HiTransG P的完全培养基中进行感染,MOI为10;LV-has-miR-155-5p inhibiton慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80％的最佳条件为在含HiTransG A的完全培养基中进行感染,MOI为100.qRT-PCR结果显示AB 8/13-LV-has-miR-155细胞株的miR-155表达量明显升高,AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton细胞株的miR-155表达量降低.结论 成功构建AB 8/13-LV-has-miR-155稳定细胞株和AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton稳定细胞株,为进一步探究miR-155在人足细胞焦亡中的作用机制奠定基础.

关键词：AB 8/13细胞、慢病毒载体、miR-155

所属期刊栏目：50

分类号：R692(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;广西自然科学基金项目;广西自然科学基金项目;右江民族医学院学术学位硕士研究生创新计划项目

在线出版日期：2022-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：321-327