不同浓度miR-155mimics和miR-155 inihibitor在足细胞中的转染效果

摘要：

目的 探讨瞬时转染miR-155mimics和miR-155 inihibitor化学合成物在足细胞中表达变化及其稳定情况.方法 体外培养小鼠肾小球足细胞,用脂质体法将miR-155mimics∕NC、miR-155 inihibitor∕NC、Cy3 miR-155 mimics∕inhibi-tor NC转染足细胞,构建足细胞内miR-155高表达模型、低表达模型、荧光基团.然后用免疫荧光显微镜观察不同剂量LipofectamineTM 2000转染不同浓度Cy3 miR-155 NC后的荧光转染效果.用实时荧光定量PCR技术检测足细胞中miR-155mimics浓度梯度(50、80、100 nmol∕mL)、miR-155 inihibitor浓度梯度(80、100、150 nmol∕mL)的miRNA-155表达.结果 达到一定剂量的LipofectamineTM 2000足以饱和不同浓度的miRNA,并将不同浓度Cy3 miR-155 NC成功转入足细胞内,且转染效率达80％以上.qRT-PCR结果显示转染miR-155mimics、miR-155 inihibitor 24 h后,miR-155在足细胞中的表达明显改变,与阴性对照组(NC)比较差异有统计学意义,表明转染成功.转染80 nmol∕mL浓度的miR-155mimics,miR-155在足细胞中的表达明显上调(P<0.001),与其他浓度对比表达量升高,差异有统计学意义.转染150 nmol∕mL浓度的miR-155 inihibitor,miR-155在足细胞中的表达明显下调(P<0.001),与其他浓度对比表达量降低,差异有统计学意义.结论 LipofectamineTM 2000达到适当剂量时将各工作浓度的miRNA-155转入足细胞内的转染效果高.80 nmol∕mL的miR-155mimics和150 nmol∕mL的miR-155 inhibitor可能较适合用于实验研究.

关键词：足细胞、miR-155mimics、miR-155inihibitor、LipofectamineTM2000

所属期刊栏目：47

分类号：R329.2+6(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金;广西自然科学基金;百色市科学研究;技术开发计划项目

在线出版日期：2020-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：886-891