小鼠新基因Ayu17-449的克隆及表达分析

摘要：

在利用PU8捕获载体从小鼠ES细胞中寻找有关对发育起重要作用基因时,一阳性ES克隆编号为Ayu17-449被捕获,经过Southern blotting法证实捕获载体单一整合在Ayu17-449号ES细胞的基因组中.通过用5′RACE法得到所捕获基因的一小段cDNA,在EST数据库中比对,得到一5 523 bp cDNA序列,在Celera数据库中它包含于两个相邻基因,根据这两个基因的mRNA设立了一系列的引物进行RT-PCR和测序,用这两个基因的不同片段分别作探针进行Northernblotting分析,确定这是一个RNA约9 kb并编码1 920个氨基酸的新基因(定名为Ayu17-449基因,其cDNA序列和编码蛋白序列发表在NCBI数据库,编号为DQ079067).Northernblotting揭示Ayu17-449基因高度表达在小鼠的脑、肾脏、心脏、肺、肌肉和胃等组织.PU8捕获载体具有X-gal报告基因,能从蛋白表达水平揭示它所捕获的基因的表达模式.X-gal染色结果显示,Ayu17-449蛋白高度表达在小鼠的脑、肾脏、心脏等组织,与Northern blotting法的结果高度一致.X-gal染色切片结果进一步证明Ayu17-449蛋白主要表达在脑的神经细胞和肾脏近曲小管细胞中.Ayu17-449基因的编码蛋白在数据库(Scansite,http://scansite.mit.edu/)做功能基团分析后,揭示其编码蛋白的N末端含有Granin基团,大量文献证实Granin基团具有参与激素的分泌的功能,显示Ayu17-449基因可能与激素的分泌有关.

关键词：基因捕获法、Ayu17-449基因、全长cDNA、Granin基因

所属期刊栏目：33

分类号：Q95(动物学)

资助基金：Research Startup Grant from Chongqing University of Medical SciencesB9001-0228418046;the Natural Sciences Foundation of Chongqing2005BB5035;Grants-in-aid for Scientific Research from the Ministry of Education, Science and Culture of Japan

在线出版日期：2006-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：413-419