BALB/c小鼠胚胎干细胞系建立的方法学探讨

摘要：

以小鼠胚胎成纤维细胞(ME)为饲养层,以大鼠心脏细胞条件培养基(RH-CM)为ES细胞培养基,全面、详尽地对BALB/c小鼠ES细胞的建系和培养方法进行了探讨,成功地建立了一套建立和培养BALB/c小鼠ES细胞系的新方法.这一培养条件不但有效地维持了ES细胞的未分化状态和正常二倍体核型,而且维持了其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征;实验设计了两种离散方法和两种浓度的消化液,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落.两种离散方法即"一次离散法",和"多次离散法",两种浓度的消化液即0.25髎 Trypsin-0.04髎 EDTA和0.05髎 Trypsin-0.008髎 EDTA;同时对ICM离散时机、RH-CM在BALB/c小鼠ES细胞建系和培养中作用进行了探讨.结果表明:在低浓度消化液作用下,采用"多次离散法"离散增殖4天的ICM和ES集落的方法建立BALB/c小鼠的ES细胞系是理想的;从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定以及体内外分化能力表明,所建立的9个BALB/c小鼠ES细胞系符合小鼠胚胎干细胞的一系列特征.

关键词：BALB/c小鼠、胚胎干细胞、大鼠心脏细胞条件培养基(RH-CM)、内细胞团(ICM)、二倍体核型

所属期刊栏目：29

分类号：Q813.1+1(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金30170456

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：581-588