鸡原始生殖细胞转染条件优化

摘要：

为获得鸡原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的最佳转染效率,本研究比较不同质粒用量和不同细胞数在3种转染试剂(Lipofectamine 2000、3000和LTX&Plus Reagent)中PGCs的转染效率,利用荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting technology,FACS)辅助优化Lipofectamine 3000转染试剂,经FACS进一步分选获得带绿色荧光蛋白(GFP)的PGCs,继续培养3周后,移植回注到受体鸡胚中,移植3.5 d后分离性腺拍照观察.结果显示,转染试剂Lipofectamine 3000的转染效率最高,质粒、Lipofectamine 3000转染试剂和PGCs细胞数的配比为3μg:4μL:0.5×104个,转染5 h转染效率最高,达到23.4％,与现有的研究结果相比提高了2倍以上.移植回注PGCs到受体鸡胚中,荧光显微镜观察到鸡胚性腺中有GFP阳性细胞.本研究综合考虑转染试剂、质粒用量和细胞数量的影响因素以优化PGCs的转染条件,为高效制备转基因鸡及基因编辑鸡的研究奠定基础.

关键词：鸡、原始生殖细胞、稳定转染、脂质体

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资助基金：广东省自然科学基金项目;广东省科技计划项目;国家肉鸡产业技术体系岗位科学家项目;科技创新战略专项资金—高水平农科院建设项目

在线出版日期：2021-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：280-288