鸡胰岛素降解酶基因环状转录本克隆及其表达规律

摘要：

本课题组前期通过高通量测序发现,鸡胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)基因可能存在一个环状转录本.为确定IDE基因环状转录本(circIDE)的真实存在,探究其表达规律,本研究以吉林芦花鸡为研究对象,通过PCR扩增和测序验证了circIDE的真实存在,通过RNase R处理和反转录证实了circIDE的环形结构,通过qRT-PCR分析circIDE和IDE mRNA的时空表达规律,并对比分析了circIDE和线性IDE mRNA在正常体型芦花鸡和GHR突变的矮小体型芦花鸡中的表达差异.结果表明:鸡circIDE全长为1332 nt,由IDE基因外显子2～11环化形成.RNase R耐受性分析表明,鸡circIDE具备环形分子的一般特征,不易被RNase R降解.与oligo-d(T)18引物相比,随机引物对circIDE具有较高的反转录效率,进一步说明circIDE是一个不含poly(A)的环状结构分子.组织表达谱结果表明,circIDE在1周龄和12周龄正常体型芦花鸡肝脏和心脏高表达,在胸肌和腿肌中低表达;circIDE在肝脏组织的时序表达谱结果表明,circIDE在鸡6周龄之前为低表达,在8周龄以后表现为高表达;正常与矮小体型芦花鸡品系间circIDE表达量对比分析表明,正常体型芦花鸡circIDE表达水平高于矮小体型芦花鸡,其中在肝脏组织中差异显著(P<0.05).本研究证实了鸡IDE基因存在一个环状转录本circIDE,并初步揭示了circIDE的表达规律,circIDE在正常体型和矮小体型芦花鸡肝脏组织中表达量存在差异,本研究结果为深入开展鸡circIDE的生物学功能及其在鸡生长发育过程中的作用机制奠定了基础.

关键词：鸡、胰岛素降解酶、环状RNA、可变剪接

所属期刊栏目：41

分类号：S88;X17

资助基金：国家自然科学基金项目31672412,31972550;广东省自然科学基金项目2017A030307002;农业部鸡遗传育种与繁殖重点实验室开放项目201501

在线出版日期：2020-01-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1129-1137