MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率

摘要：

基因组DNA发生双链断裂(double strand break,DSB)后主要通过同源定向修复(homologous-directed repair,HDR)和非同源末端连接(nonhomologous end joining,NHEJ)两种途径进行修复,其中单链寡聚核苷酸(single-stranded oligodeoxyribonucleotide,ssODN)介导的同源定向修复是动物基因组常用的基因组定点修饰技术,具有较大的科研和应用价值.为提高猪基因组ssODN介导HDR效率,本研究以猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)为研究对象,利用丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)抑制剂PD0325901培养细胞,研究其对HDR效率的影响及作用分子机理.结果显示,PD0325901能显著提高PFFs的G2期和S期细胞群百分比,减少G1期细胞群比率,促进HDR修复因子的表达.在最适浓度250 nmol/L时,PD0325901使ssODN介导的GFP报告载体的修复效率提高了58.8％;同时使PFFs基因组位点DMD和ROSA26定点修饰效率分别提高了48.16％和17.64％.本研究表明,MEK抑制剂PD0325901能显著提高猪基因组ssODN介导的同源定向修复效率,为高效制备定点基因修饰动物模型提供了新思路.

关键词：MEK抑制剂、同源定向修复(HDR)、PD0325901、基因编辑

所属期刊栏目：41

资助基金：国家自然科学基金项目31772555;国家转基因重大专项2016ZX08006002

在线出版日期：2019-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：327-336