不同电转仪的电转参数、质粒用量和拓扑结构对猪胎儿成纤维细胞转染效率的影响

摘要：

为获得猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)最佳的电转染效率,本研究利用荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)辅助优化NEPA 21和NucleofectorTM 2b两种电转仪电转染PFFs细胞的参数,比较不同质粒用量和拓扑结构在ECM(R) 830、NEPA 21和NucleofectorTM 2b中的转染效率.结果显示:NEPA 21电转PFFs的最佳穿孔参数为脉冲电压200 V,脉冲长度3 ms,脉冲间隔50 ms,脉冲次数3次,脉冲电压衰减幅度10％;NucleofectorTM 2b在U-023的转染参数下达到最高转染效率.ECM(R) 830和NucleofectorTM 2b的最适质粒用量都为10 μg,而NEPA 21为8μg;超螺旋质粒比线性化质粒的转染效率更高,且3种仪器中NucleofectorTM 2b转染效果最佳.本研究综合考虑电转仪、电转参数、质粒用量和拓扑结构的影响因素以优化PFFs的电转条件,为高效制备转基因猪及基因编辑猪的研究奠定基础.

关键词：电转染、猪胎儿成纤维细胞、ECM(R) 830、NEPA 21、NucleofectorTM 2b

所属期刊栏目：39

分类号：S85;S81

资助基金：国家转基因重大专项编号:2016ZX08006002课题,广东省科技厅平台条件建设项目2013B070702003;粤西“扬帆计划”博士后人才扶持基金资助项目2016资助[Supported by the National Transgenic Major Project2016ZX08006002;Department of Science and Technology of Guangdong Province2013B070702003;Yuexi "Flying Sail Program" Postdoctoral Foundation2016]

在线出版日期：2017-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：930-938