siRNA 干扰绵羊胚胎成纤维细胞 Lig4基因增加同源重组载体重连修复效率

摘要：

在动物细胞中，抑制非同源末端连接(Non-homologous end joining, NHEJ)修复途径，可以提高同源重组(Homologous recombination, HR)修复基因组双链断裂(Double-strand brakes, DSBs)的发生概率。为了提高绵羊胚胎成纤维细胞的 HR 效率，针对 NHEJ 修复途径中的关键因子 Lig4(DNA ligase 4)基因，本文设计合成4个具有靶向性的 siRNA(Small interfering RNA)。绵羊胚胎成纤维细胞经电转染导入 siRNA，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和 Western blotting 检测，筛选出有效抑制 Lig4基因表达的2个 siRNA。应用质粒重连法检测HR 修复效率，将 I-SceⅠ酶线性化的 HR 质粒和 siRNA 共转染绵羊胚胎成纤维细胞，经72 h 培养及流式细胞仪检测，与对照组细胞比较，结果表明 HR 质粒重连效率提高了3~4倍。瞬间干扰 Lig4基因的表达可提高 HR质粒重连效率，为改善绵羊胚胎成纤维细胞基因打靶效率提供理论基础。

关键词：siRNA、Lig4 基因、同源重组、绵羊胚胎成纤维细胞

所属期刊栏目：38

分类号：R73;R71

资助基金：国家自然科学基釐项目编号31560321，31360276;兵团国际合作项目编号2013BC004资助[Supported by the National Natural Science Foundation of China.31560321,31360276;International Cooperation Program in Xinjiang Production and Construction Corps No.2013BC004]

在线出版日期：2016-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：831-840