快速构建多重sgRNA载体利用CRISPR/Cas9技术敲除拟南芥IAA2基因

摘要：

IAA2(Indole Acetic Acid2)是拟南芥Aux/IAA生长素响应基因大家族中的一员,目前还没有它的突变体的报道,阻碍了对其功能和作用机制的深入研究.在CRISPR/Cas9基因组编辑技术中,1个sgRNA只能靶向基因的1个位点,有时基因敲除的效率并不高.为了提高敲除效率,本文在Golden-Gate克隆技术的基础上,通过两轮PCR扩增,将每3个sgRNA串联到同1个入门载体中,再将入门载体与含Cas9表达框的目标载体LR反应,获得最终的表达载体.结果表明,设计的6个sgRNA有4个发挥了作用,产生了碱基插入突变和大片段缺失突变等多种可遗传的突变.与单个sgRNA相比,多重sgRNA的基因敲除效率高、种系突变多;与其他构建多重sgRNA载体的方法相比,本方法具有快速、高效等优点.本文所得到的5个突变体为后续的IAA2功能研究提供了良好的材料.

关键词：CRISPR/Cas9、多重sgRNA串联、基因组编辑、IAA2基因

所属期刊栏目：38

分类号：R73;R57

资助基金：国家自然科学基金项目31170211;浙江省科技计划项目编号:2012C12902资助[Supported by the National Natural Science Foundation of China31170211;Science and Technology Research Projects of Zhejiang ProvinceNo.2012C12902]

在线出版日期：2016-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：756-764