肺癌循环肿瘤细胞的单细胞EGFR基因突变检测

摘要：

循环肿瘤细胞（Circulating tumor cells，CTCs）是从肿瘤原发病灶脱落并侵入外周血循环的肿瘤细胞。由于CTCs存在较大的异质性，其与癌症发展转移密切相关，但目前尚缺乏有效的CTCs单细胞异质性检测方法。鉴于此，本文发展了在单细胞层面对 CTCs 进行基因突变的检测方法并用于单个肺癌 CTC 的 EGFR （Epidermal growth factor receptor）基因突变检测。首先用集成式微流控系统完成血液中稀有CTCs的捕获，接着将CTCs释放入含有多个微孔的微阵列芯片中，得到含有单个CTC的微孔，通过显微操作将单个CTC转入 PCR管内完成单细胞基因组的放大，并进行单细胞的 EGFR基因突变检测。以非小细胞肺癌细胞系 A549、NCI-H1650和 NCI-H1975为样本，通过芯片与毛细管修饰、引物扩增条件（复性温度、循环次数）的优化，结果显示在复性温度59℃、30个循环次数的条件下，引物扩增效果最优。利用该方法成功地对非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer, NSCLC）患者的血液样本进行了测试。从患者2 mL血液中获取5个CTCs，分别对其 EGFR基因的第18、19、20、21外显子进行测序，发现该患者 CTCs均为 EGFR野生型。研究结果证明此检测方法可以灵敏地用于单个CTC基因突变的检测，在临床研究上具有重要的指导意义。

关键词：循环肿瘤细胞、微流控芯片、单细胞基因突变检测、EGFR

分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金项目编号21205077;上海市自然科学基金项目编号13ZR1456100;教育部博士点基金编号20130073120106

在线出版日期：2016-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1251-1257