徐淮山羊Oct4启动子功能的初步分析

摘要：

为确定徐淮山羊Oct4(Octamer-binding transcription factor 4)基因启动子活性区域,并初步探讨TSA(Trichostatin A)和VPA(Valproic acid)对Oct4基因启动子活性的调控作用,文章采用Primer5.0设计包含Oct4基因启动子不同长度片段的特异性PCR引物,扩增并定向克隆至PGL3-Bacic荧光素酶报告载体,分别转染gEF、P19和COS7细胞,通过TSA和VPA诱导,进行双荧光报告基因活性检测.同时用Oct4启动子-1516～+30 bp片段替换pEGFP-N1中的CMV启动子,通过GFP荧光表达检测Oct4启动子的活性.结果表明:在gEF、P19和COS7细胞中Oct4启动子各片段均表现出不同程度的活性,且最强活性区域为上游-1516～+30 bp,基本活性区域为-238～+30 bp;在-1516～-946 bp、-615～-96 bp区域存在正调控元件,在-1936～-1516 bp、-946～-615 bp区域存在负调控元件;终浓度为1μtmol/L的TSA和4 mmol/L的VPA为诱导的最佳浓度,均能显著增强Oct4基因启动子的活性;-1516～+30 bp片段能够启动GFP的表达.研究结果为揭示Oct4基因的转录调控机制奠定了基础.

关键词：Oct4、启动子活性、TSA、VPA、诱导

所属期刊栏目：36

分类号：S8 ;R73

资助基金：国家转基因重大专项2013ZX08008-003

在线出版日期：2014-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：793-799