东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry 的表达和酶活分析
通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry 氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His 被Lys 所取代.为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21 中,利用IPTG 诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Western blotting 鉴定,获得成分均一的活性蛋白.利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry 酶活力与比活力.SDS-PAGE 电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting 结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry 仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱.
东亚三角涡虫、胰蛋白酶、蛋白表达、酶活
34
S85;TS2
国家自然科学基金项目31172074 和山东省自然科学基金项目
2012-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
609-614
