热量限制通过HNF3γ下调NOX4表达来抑制内皮细胞的衰老
为了观察热量限制对主动脉内皮细胞中HNF3γ及NOX4 基因表达的影响,揭示HNF3γ-NOX4-活性氧通路介导热量限制抗内皮细胞衰老的分子机制,文章将主动脉内皮细胞分为5 组:对照组、高热量组、低热量组、siRNA+ 低热量组、siRNA+ 高热量组.应用逆转录实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR) 、Western blotting 分析各组HNF3γ、NOX4 mRNA 及蛋白水平变化,并检测各组细胞内活性氧产量及细胞衰老程度变化.采用染色质免疫共沉淀分析HNF3γ蛋白与NOX4 基因启动子区域结合情况,萤光素酶报告基因检测HNF3γ蛋白结合后对NOX4 基因启动子活性的影响.结果显示:与对照组比较,低热量组HNF3γ mRNA 和总HNF3γ蛋白表达水平、磷酸化/总HNF3γ比值显著升高(P<0.05),NOX4 mRNA 和蛋白表达水平、细胞内活性氧产量及细胞衰老程度显著降低(P<0.05); 高热量组HNF3γ mRNA 和总HNF3γ蛋白表达水平、磷酸化/总HNF3γ比值显著降低(P<0.05),NOX4 mRNA 和蛋白表达水平、细胞内活性氧产量及细胞衰老程度显著升高(P<0.05); siRNA+ 低热量组及siRNA+ 高热量组中NOX4 mRNA 和蛋白表达水平、细胞内活性氧水平及细胞衰老程度显著升高(P< 0.05).染色质免疫共沉淀证实HNF3γ蛋白可与NOX4 基因启动区域4 个结合位点(.6 bp 、.76 bp 、.249 bp 、.954 bp) 结合.萤光素酶报告基因检测显示HNF3γ蛋白与NOX4 启动子区域1 个位点(.6 bp)、2 个位点(.6、.76 bp) 、3 个位点(.6、.76、.249 bp) 、4 个位点(.6、.76、.249 、.954 bp) 结合,可使NOX4 启动子活性分别降低至对照组的80.15±4.64% 、40.02.±2.15% 、16.46±2.24% 、12.13±1.46%,P<0.05.上述结果提示热量限制可上调HNF3γ基因表达,增强HNF3γ蛋白活性,促进HNF3γ蛋白同NOX4 基因启动子区域结合,抑制NOX4 基因表达,进而减少细胞内活性氧产生而延缓动脉内皮细胞衰老.
热量限制、内皮细胞、HNF3γ、NOX4、衰老
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R73;R97
浙江省科技厅公益性技术应用研究计划项目2011C23016 资助
2012-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共11页
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