siRNA靶向沉默p22phox表达对内皮细胞衰老抑制作用的研究

摘要：

设计特异性siRNA(Short interference RNA)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞NAD(P)H氧化酶活性亚单位p22phox基因沉默,探讨p22phox基因沉默在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的ECV-304衰老中的作用及机理.应用体外转录合成3种siRNA转染体外培养的ECV-304,RT-PCR鉴定对p22phox基因沉默的效率和特异性,确立适宜的转染浓度和基因沉默的持续时间;ECV-304分为空白对照组、AngⅡ组、siRNA转染组、AngⅡ+siRNA转染组,观察细胞衰老改变及活性氧水平,分析各组细胞p22phox的mRNA及蛋白表达.结果表明:3种siRNA中,一种对p22phoxmRNA表达抑制率达到83%,在一定转染浓度范围内,siRNA诱导的基因沉默效率呈剂量依赖性,抑制效率高峰期在24～36 h;给予AngⅡ后,β-gal染色阳性细胞数显著增加,出现衰老的特征性改变,衰老细胞p22phox的mRNA及蛋白表达增加,伴有一氧化氮(NO)生成减少,活性氧生成增加,siRNA诱导p22phox基因沉默后降低了活性氧水平,增加NO生成,改善了Ang Ⅱ诱导的ECV-304细胞的衰老改变.siRNA干扰技术可成功诱导NAD(P)H氧化酶p22phox基因沉默,从而减缓AngⅡ诱导体外培养的ECV-304衰老进程,p22phox是防治衰老有希望的分子靶点.

关键词：血管紧张素Ⅱ、p22phox、内皮细胞、衰老、siRNA

所属期刊栏目：30

分类号：R45;R96

资助基金：南京医科大学科技发展基金编号:07NMUM075项目Supported by Nanjing Medical University07NMUM075

在线出版日期：2009-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1175-1181