小麦线粒体DNA的高效提取方法

摘要：

以小麦黄化苗为材料,通过简单差速离心、DNase Ⅰ处理得到无核DNA杂质的线粒体,用SDS和蛋白酶K裂解线粒体,经酚/氯仿抽提除去蛋白,并用RNase A消化而得到单纯线粒体DNA(mtDNA).对所提取的mtDNA进行紫外吸收光度分析,A260/A280平均为1.92,A260/A230平均为2.09,平均每克黄化苗可提取mtDNA26.85 μg;并对mtDNA进行琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增,均得到清晰的电泳图谱.结果表明:此提取方法得到的mtDNA,不但产率高、结构完整,而且能有效去除核DNA、RNA和蛋白质等杂质,获得高质量的mtDNA用于PCR反应和各种遗传学分析.研究还发现,通过调整线粒体裂解温度(先50℃裂解1 h,再37℃裂解1 h),亦可大幅度提高mtDNA的产率.

关键词：小麦、线粒体、mtDNA、提取方法、RAPD

所属期刊栏目：29

分类号：S5(农作物)

资助基金：国家自然科学基金301705760;国家高技术研究发展计划863计划2002AA207004;国家杨凌农业生物技术育种中心专项基金

在线出版日期：2007-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：771-775