一种通用高效的复杂载体构建的新方法

摘要：

文章报道了一种简便、通用、高效的复杂载体构建方法.此法是在PCR引物设计时,在目的片段5′端加上随机设计的接头,利用PCR克隆目的片段,再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性处理PCR克隆目的片段,产生多个首尾相匹配的黏性末端,进行多片段定向连接、转化、重组子鉴定.以7片段拼接的水稻单交换质体定点整合表达载体pRSMGA的构建为例,应用上述方法构建只需做两次连接、转化,且其重组、转化效率高.数10次实验证明:这是一种简便、通用、高效的复杂构建载体的方法,该法至今尚未见报道.

关键词：复杂载体构建、新方法、T4、DNA聚合酶、水稻

所属期刊栏目：28

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技攻关项目2002AA227011;湖北省自然科学基金2003ABA118

在线出版日期：2006-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：212-218