Red/ET重组在基因打靶载体快速构建中的应用

摘要：

通过合理应用Red/ET重组技术实现基因打靶载体的快速构建.在Red/ET重组介导下,首先从基因组DNA中将靶基因片段亚克隆至打靶质粒载体中,随后将两端带有50 bp同源臂的抗性筛选基因插入并替换靶基因上的目标序列,如此两步操作即可完成一个传统型基因敲除打靶载体的构建;结合Cre-IoxP系统,在传统型基因敲除打靶载体的基础上,经过再一轮的Red/ET重组就能够成功实现条件性基因敲除打靶载体的构建.整个实验过程不需要PCR扩增长、短臂序列,也不涉及酶切、连接反应,因此,不仅省时、省力,而且所构建的基因打靶载体序列准确,无突变.实验方法的建立为加速后基因组时代的基因功能研究提供了一条捷径.

关键词：基因打靶载体构建、Red/ET重组、基因敲除

所属期刊栏目：27

分类号：R394

资助基金：第三军医大学校科研和教改项目

在线出版日期：2006-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：953-958