具血型转换功能的咖啡α-半乳糖苷酶基因的克隆与表达

摘要：

从大粒种咖啡(Coffea liberica)和中粒种咖啡(Coffea canephora)中分离克隆到了α-半乳糖苷酶(α-D-gal-actosidase)cDNA的开放阅读框架即编码区,分别记为Gal-D与Gal-Z,长度与已发表的小粒种咖啡cDNA编码序列相同均为1 089 bp,同源性与已发表的小粒种咖啡cDNA编码序列相比分别为98.7%和99.27%.将克隆到的Gal-D与Gal-Z用巴斯德毕赤氏酵母Pichia pastoris表达载体pPICZαA(分泌甲醇诱导型)和pGAPZαA(分泌组成型)成功地构建了如下酵母表达载体:pPICZαA/Gal-Z,pPICZαA/Gal-D和pGAPZαA/Gal-D,并转入酵母宿主菌GS115进行了发酵表达研究.实验得出工程菌株pPICZαA/Gal-D/GS115的重组表达产物酶活最高可达48 22(U/mL),对发酵产物进行了SDS-PAGE电泳,得到一条清晰的主条带.

关键词：α-半乳糖苷酶、cDNA克隆、咖啡豆、B→O血型转换、P.pastoris

所属期刊栏目：27

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2005-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：759-764