气肿疽梭菌鞭毛基因克隆载体的构建

摘要：

根据GenBank中发表的气肿疽鞭毛蛋白的结构基因FliA(C)的序列,从中截取抗原表位部分基因序列,设计合成1对引物,引物的5'和3'端分别加入了BamH Ⅰ和XhoⅠ 2个酶切位点.通过降落PCR法扩增合成长度为429 bp的目的基因片段.将PCR产物克隆于pMD18-T simple载体,之后将其转入大肠杆菌DH 5α感受态细胞筛选阳性克隆.提取扩增后的重组质粒pMD18-T-FliA(C)并进行PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定.结果表明:扩增的目的基因与GenBank登录的ATCC10092菌株序列同源性为99％,4个碱基不同,仅有1个氨基酸不同.测出的基因序列发表于GenBank,登录号为KF712490.试验证明用降落PCR方法能方便、快速、准确的获得目的基因片段.本试验成功构建了重组克隆载体pMD18-T-FliA (C),为气肿疽鞭毛蛋白的表达载体构建及鞭毛蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础.

关键词：气肿疽鞭毛蛋白基因、降落PCR、重组质粒、基因克隆

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分类号：S854.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：吉林省教育厅重点项目吉教科合字2014第6号;延边大学大学生创新创业训练计划项目ydbksky2015239

在线出版日期：2015-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：91-95