肾脏过表达GJB1基因动物模型的构建

摘要：

目的 构建小鼠过表达GJB1基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,建立一种小鼠肾脏过表达GJB1基因的动物模型.方法 采用PCR扩增制备小鼠GJB1基因片段,利用基因重组技术构建含GJB1基因的重组质粒,将携带小鼠GJB1基因的腺相关病毒(AAV)穿梭质粒与pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞,通过选择培养基筛选出同源重组的阳性克隆获得rAAV.将30只成年C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组各6只(W1组、W2组、W3组、W4组及空白对照组),经尾静脉将rAAV注射到W1～W4组小鼠体内,分别于注射后1周、2周、3周、4周取其心脏、肝脏、肾脏组织行PCR检测GJB1 mRNA的表达情况,并经石蜡包埋切片后采用免疫组织化学法检测Cx32的表达.结果 含GJB1基因的rAAV被成功构建.随着注射后时间的延长,小鼠肾脏组织GJB1基因转录及Cx32蛋白表达强度均逐渐增强,与空白对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05),而其他器官(肝脏、心脏)GJB1基因表达未见明显增强(P均>0.05).结论 采用rAAV技术可成功构建肾脏过表达GJB1基因的小鼠模型,这对深入研究GJB1基因在肾损伤中的作用机制、评估以GJB1为治疗靶点的药物疗效等具有重要的科学价值和临床意义.

关键词：GJB1基因、重组腺相关病毒、急性肾损伤、小鼠模型

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资助基金：国家自然科学基金;广东省基础与应用基础研究基金项目

在线出版日期：2020-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：817-823