桩蛋白基因克隆及其在肝癌细胞Hep G2中的作用

摘要：

目的 克隆桩蛋白基因(PXN)的蛋白编码区并构建PXN基因真核表达载体,建立PXN稳转肝癌细胞株,分析PXN基因对肝癌细胞的作用.方法 Trizol法提取肝癌细胞总RNA并逆转录成cDNA,PCR法扩增PXN基因蛋白编码区并构建真核表达质粒pEBFP-PXN.脂质体法转染肝癌细胞Hep G2,G418筛选培养获得桩蛋白高表达稳转肝癌细胞株.实时无标记细胞分析检测细胞生长速率,细胞创伤-愈合实验分析细胞迁移速率.蛋白免疫印迹法检测细胞内蛋白表达变化.结果 成功克隆PXN基因并构建真核表达载体pEBFP-PXN.获得桩蛋白高表达单克隆稳转肝癌细胞株,胞内显示蓝色荧光,蛋白免疫印迹法显示稳转株内表达外源融合蛋白BFP-PXN.桩蛋白表达不影响Hep G2肝癌细胞的生长速率但可以抑制其细胞迁移,稳转细胞上皮标志蛋白E-Cadherin表达升高、间质标志物N-Cadherin和Vimentin表达下降.结论 PXN基因不影响Hep G2肝癌细胞生长增殖速率但可以抑制其细胞迁移,这可能与其可以影响肝癌细胞上皮-间质转化标志蛋白表达有关.

关键词：肝癌细胞、桩蛋白基因、真核表达、细胞迁移

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资助基金：国家自然科学基金81560390;贵州省科学技术基金黔科合基础[2017]1147

在线出版日期：2019-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：671-675