微RNA-140-5p靶向调节血管内皮生长因子表达对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响
目的 探讨微RNA(miR)-140-5p靶向调节血管内皮生长因子(VEGF)表达对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(hRECs)增殖、迁移和管腔形成的影响.方法 将对数生长期hRECs细胞分为正常对照组、高糖组、miR-140-5p组、阴性对照(NC)组、高糖+miR-140-5p组.正常对照组和高糖组细胞不做任何转染,miR-140-5p组和高糖+miR-140-5p组细胞转染miR-140-5p模拟物(miR-140-5p mimics),NC组细胞转染阴性对照模拟物(mimics NC).高糖组和高糖+miR-140-5p组细胞用含30 mmol·L-1葡萄糖的培养基制备高糖模型.应用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组细胞中miR-140-5p表达水平,噻唑蓝法检测各组细胞增殖能力,Transwell法检测各组细胞迁移能力,管腔形成实验检测各组细胞成管能力,Western blot法检测各组细胞中VEGF蛋白的表达.将40只Sprague Dawley大鼠随机分成正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病+NC组、糖尿病+miR-140-5p组,每组10只.除正常对照组外,其余各组大鼠腹腔注射65 mg·kg-1链脲佐菌素制备糖尿病模型,正常对照组和糖尿病模型组大鼠尾静脉注射200 μL生理盐水,糖尿病+miR-140-5p组大鼠尾静脉注射200 pL miR-140-5p,糖尿病+NC组大鼠尾静脉注射200 μL mimics NC,每日1次,持续给药7 d;再继续饲养8周,大鼠麻醉后,取视网膜,苏木精-伊红染色观察miR-140-5p对糖尿病模型大鼠视网膜血管生成的影响.结果 高糖组、高糖+miR-140-5p组细胞中miR-140-5p相对表达量显著低于正常对照组,miR-140-5p组细胞中miR-140-5p相对表达量显著高于正常对照组(P＜0.01);NC组与正常对照组细胞中miR-140-5p 相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).miR-140-5p组、NC组、高糖+miR-140-5p组细胞中miR-140-5p相对表达量显著高于高糖组(P＜0.01).NC组、高糖+miR-140-5p组细胞中miR-140-5p相对表达量显著低于miR-140-5p组(P＜0.01).高糖+miR-140-5p组细胞中miR-140-5p相对表达量显著低于NC组(P＜0.05).培养24、48、72 h时,高糖组细胞增殖率均显著高于正常对照组(P＜0.01),miR-140-5p组、NC组与正常对照组细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).培养24 h时,高糖+miR-140-5p组与正常对照组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P＞0.05);培养48、72 h时,高糖+miR-140-5p组细胞增殖率显著高于正常对照组(P＜0.01).培养24、48、72 h时,miR-140-5p组、NC组、高糖+miR-140-5p组细胞增殖率均显著低于高糖组(P＜0.05).培养24、48、72 h时,NC组与miR-140-5p组细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).培养24 h时,高糖+miR-140-5p组细胞增殖率与miR-140-5p组、NC组比较差异无统计学意义(P＞0.05);培养48、72 h时,高糖+miR-140-5p组细胞增殖率显著高于miR-140-5p组和NC组(P＜0.01).高糖组迁移细胞数显著高于正常对照组,miR-140-5p组、NC组迁移细胞数显著低于正常对照组(P＜0.01).高糖+miR-140-5p组与正常对照组迁移细胞数比较差异无统计学意义(P＞0.05).miR-140-5p组、NC组、高糖+miR-140-5p组迁移细胞数显著低于高糖组(P＜0.01).NC组、高糖+miR-140-5p组迁移细胞数均显著高于miR-140-5p组(P＜0.01).高糖+miR-140-5p组迁移细胞数显著高于NC组(P＜0.01).高糖组管腔形成数量显著高于正常对照组,miR-140-5p组、NC组细胞管腔形成数量显著低于正常对照组(P＜0.01);高糖+miR-140-5p组与正常对照组细胞管腔形成数量比较差异无统计学意义(P＞0.05).miR-140-5p组、NC组、高糖+miR-140-5p组细胞管腔形成数量均显著低于高糖组(P＜0.01).NC组、高糖+miR-140-5p组细胞管腔形成数量均显著高于miR-140-5p组(P＜0.05).高糖+miR-140-5p组细胞管腔形成数量显著高于NC组(P＜0.05).高糖组、高糖+miR-140-5p组细胞中VEGF蛋白相对表达量显著高于正常对照组,miR-140-5p组细胞中VEGF蛋白相对表达量显著低于正常对照组(P＜0.05);NC组与正常对照组细胞中VEGF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).miR-140-5p组、NC组、高糖+miR-140-5p组细胞中VEGF蛋白相对表达量显著低于高糖组(P＜0.01).NC组、高糖+miR-140-5p组细胞中VEGF蛋白相对表达量显著高于miR-140-5p组(P＜0.01).高糖+miR-140-5p组细胞中VEGF蛋白相对表达量显著高于NC组(P＜0.05).正常对照组大鼠靠近视乳头处的视网膜血管整体呈"树状结构",内极部毛细血管分布较致密,外极部毛细血管分布较疏松,血管壁均匀.糖尿病模型组大鼠视网膜血管的"树状结构"被破坏,毛细血管分布不均匀,毛细血管瘤形成.糖尿病+NC组大鼠视网膜血管损伤与糖尿病模型组相当.糖尿病+miR-140-5p组大鼠视网膜血管的损伤情况有所好转,毛细血管瘤减少.结论 miR-140-5p可以抑制hRECs在高糖条件下的增殖、迁移及成管能力,缓解糖尿病大鼠视网膜血管病变,其作用可能是通过miR-140-5p靶向调控VEGF的表达而实现.
微RNA-140-5p、血管内皮生长因子、视网膜血管病变、人视网膜血管内皮细胞
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R587.2(内分泌腺疾病及代谢病)
新疆维吾尔自治区自然科学基金资金资助项目2020D01A127
2023-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
917-925
