丹参通络解毒汤对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子/成纤维细胞生长因子诱导14通路的影响
目的 观察丹参通络解毒汤对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)/成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)通路的影响,探讨其对小鼠肺纤维化的影响及机制.方法 取C57B/L小鼠50只随机分为空白组、模型组、1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+TWEAK/Fn14抑制剂PDL192组.模型组、1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠气管内注射博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型.造模成功后,空白组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水10 mL·kg-1;1,25(OH)2D3组小鼠每日经腹腔注射1,25(OH)2D35μg·kg-1;丹参通络解毒汤组小鼠每日灌胃丹参通络解毒汤汤剂0.039 mL·g-1(按成人60 kg体质量计算,相当于生药15.65 g·kg-1);丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠每日灌胃丹参通络解毒汤汤剂0.039 mL·g-1,并经腹腔注射PDL1923 mg·kg-1;各组小鼠均每日给药1次,连续给药28 d;末次给药后12 h测体质量,然后经腹腔注射戊巴比妥钠进行麻醉、固定,采集肺支气管肺泡灌洗液(BALF),开胸取肺组织,测肺质量,计算小鼠肺系数.采用酶标仪检测5组小鼠BALF中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)水平.苏木精-伊红染色和Masson三色法染色法观察5组小鼠肺组织病理学变化.实时荧光定量聚合酶链式反应法检测5组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达.Western blot法检测5组小鼠肺组织炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及肺组织TWEAK/Fn14通路因子TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、母亲信号蛋白同源物3(Smad3)、磷酸化母亲信号蛋白同源物3(p-Smad3)、信号传导和转录激活因子3(STAT3)、酪氨酸磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白相对表达量.结果 空白组小鼠肺组织结构正常,无结缔组织增生,无明显胶原沉积;模型组小鼠肺组织基本形态结构被破坏,支气管结构较为模糊,部分支气管上皮细胞坏死,间质周围炎症细胞浸润,肺组织有大量的胶原沉积;1,25(OH)2D3组小鼠肺组织基本形态结构被破坏,上皮细胞坏死,坏死区域肺泡腔较为狭窄,内含大量细胞碎片和炎症细胞,部分区域可见成纤维细胞增生,胶原沉积明显减少;丹参通络解毒汤组小鼠部分区域肺组织结构被破坏,支气管结构较为完整清晰,部分肺泡结构模糊,肺泡腔狭窄,间质及周围未见水肿或炎症细胞浸润,胶原沉积明显减少;丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织结构较为正常,各级支气管结构完整清晰,肺泡结构较为清晰,肺泡腔内可见少量炎症细胞散在分布,间质及周围未见水肿或炎症细胞浸润,胶原沉积明显减少.空白组、模型组、1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠体质量比较差异均无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,模型组、1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组小鼠肺系数显著增高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数显著降低(P<0.05);与1,25(OH)2D3组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数显著降低(P<0.05);1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数与丹参通络解毒汤组比较差异无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,模型组、1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组小鼠BALF中IL-1β、TNF-α、IL-4水平显著升高(P<0.05),丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、TNF-α、IL-4水平显著降低(P<0.05);与1,25(OH)2D3组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、IL-4水平显著降低(P<0.05);与丹参通络解毒汤组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、IL-4水平显著降低(P<0.05).与空白组比较,模型组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量及1,25(OH)2D3组小鼠肺组织TWEAK mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组小鼠肺组织Fn14 mRNA相对表达量及丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05).1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量各组间比较差异无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,模型组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1蛋白相对表达量及1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β蛋白相对表达量显著降低(P<0.05);与1,25(OH)2D3组比较,丹参通络解毒汤组和丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织IL-1β蛋白相对表达量显著降低(P<0.05);与丹参通络解毒汤组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织IL-1β 蛋白相对表达量显著降低(P<0.05).与空白组比较,模型组小鼠肺组织中TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),1,25(OH)2D3组小鼠肺组织中TWEAK、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织中TWEAK、α-SMA、p-Smad3、STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,1,25(OH)2D3组小鼠肺组织p-Smad3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05).丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织Fn14、TGF-β1、α-SMA、Smad3、p-Smad3、p-STAT3蛋白相对表达量及丹参通络解毒汤小鼠肺组织TWEAK、STAT3蛋白相对表达量与1,25(OH)2D3组比较差异无统计学意义(P>0.05);丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织中TWEAK、STAT3蛋白相对表达量与1,25(OH)2D3组比较显著降低(P<0.05).结论 丹参通络解毒汤能够减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制肺组织炎症和TWEAK/Fn14信号通路有关.
肺纤维化;丹参通络解毒汤;博莱霉素;肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子;成纤维细胞生长因子诱导14
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R285.5;R563(中药学)
国家中医临床研究基地业务建设科研专项JDZX2015158
2022-01-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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