变异性浆细胞瘤异位1基因对高糖培养的大鼠心脏成纤维细胞的影响及其机制
目的 探讨变异性浆细胞瘤异位1(PVT1)基因对高糖培养的大鼠心脏成纤维细胞(CF)的影响及其作用机制.方法 取对数生长期CF并随机分为空白对照组、高糖组、PVT1小干扰RNA(siRNA)组、PVT1 siRNA阴性对照(NC)组(PVT1 siRNA NC组).空白对照组和高糖组细胞不进行转染,PVT1 siRNA组及PVT1 siRNA NC组细胞分别转染PVT1 siRNA及PVT1 siRNA NC试剂;转染24 h后,高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞用含25 mmol·L-1葡萄糖的培养基培养,模拟高糖培养条件,空白对照组细胞不作处理.采用天狼猩红染色法观察高糖处理24 h后4组细胞胶原纤维沉积情况.流式细胞术检测高糖处理24 h后4组细胞细胞周期分布情况.采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测高糖处理24 h后4组细胞中PVT1、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及微RNA(miR)-93-5p的表达.采用Western blot法检测高糖处理24 h后4组细胞中TGF-β1、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad7、p21、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)表达情况.另取对数生长期CF,随机分为未转染组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组、PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组;未转染组细胞不进行转染,PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组细胞转染PVT1 siRNA和miR-93-5p inhibitor,PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组细胞转染PVT1 siRNA和miR-93-5p NC,PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组细胞转染PVT1 NC和miR-93-5p inhibitor,PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞转染PVT1 NC和miR-93-5p NC,转染24 h后,用含25 mmol·L-1葡萄糖的培养基处理5组细胞,模拟高糖培养条件.采用Western blot法检测高糖处理24 h后5组细胞中TGF-β1、Smad7、ColⅠ蛋白表达表达情况.结果 与空白对照组比较,高糖组细胞数量增多,红色胶原纤维沉积增加;与高糖组比较,PVT1 siRNA组细胞间隙变大,红色胶原纤维沉积减小;PVT1 siRNA NC组细胞红色胶原纤维沉积与高糖组相近.高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组G0+G1期细胞比例显著低于空白对照组,S+G2+M期细胞比例显著高于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组G0+G1期细胞比例显著高于高糖组,S+G2+M期细胞比例显著低于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组G0+G1期细胞比例显著低于PVT1 siRNA组,S+G2+M期细胞比例显著高于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组G0+G1期细胞比例、S+G2+M期细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05).高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β1 mRNA相对表达量均显著高于空白对照组,miR-93-5p相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组细胞中PVT1、TGF-β1 mRNA相对表达量显著低于高糖组,miR-93-5p相对表达量显著高于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β1 mRNA相对表达量均显著高于PVT1 siRNA组,miR-93-5p相对表达量显著低于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β1 mRNA及miR-93-5p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β1蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著高于空白对照组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β1蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著低于高糖组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著高于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β1蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著高于PVT1 siRNA组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著低于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、p21、TGF-β1、Smad7蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比较差异无统计学意义(P>0.05).PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β1、ColⅠ蛋白相对表达量显著低于未转染组,Smad7蛋白相对表达量显著高于未转染组(P<0.05);PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组细胞中TGF-β1、ColⅠ蛋白相对表达量显著高于未转染组,Smad7蛋白相对表达量显著低于未转染组;未转染组细胞中TGF-β1、Smad7、ColⅠ蛋白相对表达量与PVT1 NC+miR-93-5p NC组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组比较差异无统计学意义(P>0.05).PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β1、ColⅠ蛋白相对表达量显著高于PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组,Smad7蛋白相对表达量显著低于PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组(P<0.05);PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β1、ColⅠ蛋白相对表达量显著低于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组,Smad7蛋白相对表达量显著高于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组(P<0.05);PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组与PVT1 NC+miR-93-5pNC组细胞中TGF-β1、Smad7、ColⅠ蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 PVT1基因沉默可促进miR-93-5p/Smad7通路活化,抑制TGF-β1/Smad通路激活,进而抑制高糖培养的CF纤维化进程.
心脏成纤维细胞;高糖;变异性浆细胞瘤异位1基因;微RNA-93-5p;转化生长因子-β1
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R541(心脏、血管（循环系）疾病)
2019年度河南省医学科技攻关计划联合共建项目编号:LHGJ20191115
2021-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
1017-1024
