钙调磷酸酶调节因子1.4对食管癌KYSE30细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

摘要：

目的 探讨钙调磷酸酶调节因子1.4(RCAN 1.4)对食管癌KYSE 30细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 将对数生长期HEK-293T细胞分为HEK-293T-A组和HEK-293T-B组,培养至融合70％ ～80％时,分别加入用慢病毒表达载体质粒[短发卡RNA(shRNA)RCAN1.4]和LentiPac混合包装质粒制备的"DNA质粒-EndoFectin"转染复合物、"空载体质粒-EndoFectin"转染复合物,转染14 h后弃去旧培养基,加入10 mL含体积分数5％ 胎牛血清、105 U·L-1青霉素、100μg·L-1链霉素的达尔伯克改良伊格尔培养基及20μL"Titer Boost"滴度增强剂继续培养,于转染48 h后收集HEK-293T-A组和HEK-293T-B组细胞培养液,离心制备"shRNA-RCAN1.4慢病毒液"和"阴性对照慢病毒液",分别转染体外培养的食管癌KYSE30细胞,获得shRNA干扰RCAN1.4组(shRCAN1.4组)和shRNA干扰阴性对照组(shNC组)KYSE30细胞,采用Western blot法检测2组KYSE30细胞中RCAN1.4蛋白的表达;平板克隆形成实验检测2组KYSE30细胞的克隆形成能力;划痕实验检测2组KYSE30细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测2组KYSE30细胞的侵袭能力.结果 shRCAN1.4组和shNC组KYSE30细胞中RCAN1.4蛋白相对表达量分别为0.28±0.02、0.80±0.06,shRCAN 1.4组KYSE30细胞中RCAN1.4蛋白相对表达量显著低于shNC组(t=21.360,P<0.05).shRCAN1.4组和shNC组KYSE30细胞克隆形成数分别为124.33±6.03、56.67±6.11,shRCAN1.4组KYSE30细胞克隆形成数显著多于shNC组(t=13.665,P<0.05).细胞划痕培养24 h后,shRCAN1.4组和shNC组KYSE30细胞划痕愈合率分别为(70.07±3.11)％、(19.14±2.58)％,shRCAN1.4组KYSE30细胞划痕愈合率显著高于shNC组(t=21.831,P<0.05).shRCAN1.4组和shNC组KYSE30细胞侵袭数分别为143.33±12.22、83.33±8.51,shRCAN1.4组KYSE30细胞侵袭数显著多于shNC组(t=7.232,P<0.05).结论 下调食管癌KYSE30细胞中RCAN1.4基因表达可显著增强细胞的增殖、迁移和侵袭能力,RCAN1.4基因可能参与了食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭过程.

关键词：钙调磷酸酶调节因子1.4、食管癌、KYSE30细胞、细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭

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分类号：R735.1(肿瘤学)

资助基金：河南省重大科技专项基金资助项目编号;161100311200;161100311300

在线出版日期：2020-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：410-414,419