小分子干扰RNA沉默果蝇zeste基因增强子同源物2对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响
目的 探讨小分子干扰RNA (siRNA)沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法 培养宫颈癌Hela细胞,收集对数生长期Hela细胞继续培养,待贴壁细胞长满底部面积80％～90％时进行转染.将Hela细胞随机分为空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组,空白对照组Hela细胞不作处理,control siRNA组Hela细胞转染control siRNA,EZH2 siRNA组Hela细胞转染EZH2 siRNA.收集3组转染后Hela细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Hela细胞中EZH2 mRNA表达,Western blot法检测Hela细胞中EZH2蛋白表达,流式细胞术检测Hela细胞的细胞周期.收集3组转染后Hela细胞,分别加入不同质量浓度(0.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 g·L-1)的顺铂,48 h后采用四甲基偶氮唑蓝法检测Hela细胞在顺铂作用下的体外存活率.结果 Control siRNA和EZH2 siRNA可高效转染Hela细胞,转染率均达90％以上.空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量分别为396.7±88.4、389.2±70.6和98.5±20.3,EZH2siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2.057、2.015,P＜0.01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(t=1.476,P＞0.05).空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量分别为509.4±110.7、497.5±80.4和120.4±31.3,EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2.682、2.597,P＜0.01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(t=1.943,P＞0.05).EZH2 siRNA组G0/G1期细胞比例显著高于空白对照组和control siRNA组(t=2.893、3.087,P＜0.05),EZH2 siRNA组S期、G2/M期细胞比例显著低于空白对照组和control siRNA组(EZH2 siRNA组与空白对照组比较:t=2.526、5.462,P＜0.05;EZH2 siRNA组与control siRNA组比较:t=2.498、5.417,P＜0.05),空白对照组与control siRNA组Go/G1期、S期及G2/M期细胞比例比较差异均无统计学意义(t=0.926、1.017、0.947,P＞0.05).不同质量浓度顺铂作用48 h后,同一质量浓度下EZH2 siRNA组Hela细胞的存活率明显低于空白对照组及control siRNA组(P＜0.05),且随着顺铂浓度的增加,3组Hela细胞的存活率均呈逐渐下降趋势.结论 沉默EZH2表达可提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性,而阻滞细胞周期可能是其主要作用机制之一.
zeste基因增强子同源物2、宫颈癌、小分子干扰RNA、顺铂、药物敏感性
36
R737.33(肿瘤学)
河南省医学科技攻关计划项目201602157
2019-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
116-120
