P2X7受体阻断剂对三磷腺苷诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内Ca2+水平的影响
目的 观察三磷腺苷(ATP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内Ca2+水平变化的特点,并探讨P2X7受体阻断剂对其的影响.方法 取对数生长期的SH-SY5Y细胞接种于含体积分数10％胎牛血清高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)中,在37℃、体积分数5％ CO2培养箱中培养24 h,随机分为4组,分别加入含0、1、3、5 mmol·L-1ATP的培养液,每孔100 μL,各组均分别作用15、30、60 min,然后用Hank's溶液洗涤细胞3次,Fluo-3/AM染细胞内Ca2+,Hoechst 33258染细胞核.荧光显微镜下观察细胞内荧光发射强度.另取对数生长期的SH-SY5Y细胞悬液接种于含体积分数10％胎牛血清高糖DMEM的96孔板中,在37℃、体积分数5％ CO2培养箱中培养24h,随机分为正常对照组、ATP组及KN-62低、中、高剂量组,正常对照组细胞在每孔100 μL培养液中常规培养,ATP组细胞在每孔100 μL含5 mmol·L-1 ATP的培养液中培养,KN-62低、中、高剂量组细胞分别每孔先用100 μL含100、500、1 000 nmol·L-1 KN-62的培养液孵育30 min,每孔再用100 μL的5mmol·L-1 ATP培养液处理1h,用Hank's溶液洗涤细胞3次,Fluro-3/AM染色细胞内Ca2,Hoechst 33258染色细胞核.荧光显微镜下观察细胞内荧光发射强度变化,图像分析软件记录结果,测每组细胞中Ca2+的平均荧光强度.每次实验每组设3个平行复孔,实验重复3次.结果 0 mmol·L-ATP组呈现荧光的细胞数量少,荧光强度弱;1、3、5 mmol·L-1 ATP组随着ATP剂量增加,呈现荧光的细胞数量逐渐增多,荧光强度逐渐增强;若ATP剂量相同,则随着ATP作用时间的延长,呈现荧光的细胞数量逐渐增多,荧光强度逐渐增强.正常对照组、ATP组、KN-62低、中、高剂量组细胞荧光强度分别为468.24±45.67、3 292.35±159.64、3 013.27 ±321.42、2 515.77 ±320.98、2 486.32 ±318.31,ATP组细胞平均荧光强度显著强于正常对照组(P＜0.05);KN-62低、中、高剂量组细胞平均荧光强度均低于ATP组(P＜0.05).结论 ATP诱导SH-SY5Y细胞内Ca2+升高具有浓度和时间依赖性,KN-62可部分阻断ATP的这一作用.
三磷腺苷、人神经母细胞瘤、SH-SY5Y细胞、Ca2+、P2X7受体
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R739.4(肿瘤学)
国家自然科学基金资助项目81371346,81271376;河南省高等学校重点科研项目16A310013
2017-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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