红细胞预处理对小鼠脾组织P物质蛋白条带表达的影响

摘要：

目的 针对蛋白质印迹技术难以检测常规方法处理后的脾组织中的P物质(SP)蛋白,探讨更佳的脾组织处理方法.方法 小鼠颈椎脱臼处死,取脑组织测质量后进行粉碎,离心弃上清液,按照1∶10(W∶V)的比例加入细胞组织快速放射免疫沉淀裂解液和蛋白酶抑制剂混合物,裂解30 min后进行提取.脾组织蛋白按照以下3种方法进行提取:(1)采取与脑组织蛋白提取方法一致的常规方法进行提取;(2)脾组织预先采用胶原酶Ⅰ进行消化,用红细胞裂解液裂解和Hank's液洗涤处理后再进行蛋白提取;(3)脾组织不进行Hank's液洗涤,其他步骤均与第2种方法一致.最后所有组织均按相同步骤进行蛋白质印迹技术检测,观察SP蛋白表达水平.结果 用常规方法提取后,脑组织总蛋白中SP蛋白条带表达明显,脾组织总蛋白中未检测到SP蛋白条带.脾组织用红细胞裂解液处理后提取的总蛋白中SP蛋白表达条带较为明显,但有非特异性条带.脾组织用红细胞裂解液和Hank's液洗涤处理后提取的总蛋白中SP蛋白条带表达明显,无非特异性条带.结论 用红细胞裂解液和Hank's液预处理小鼠脾组织,可排除红细胞的干扰,提高其蛋白提取率,有利于P物质在蛋白质印迹技术中的条带表达.

关键词：脾组织、红细胞裂解液、差异性处理、P物质、蛋白质印迹、小鼠

所属期刊栏目：32

分类号：R392.33

资助基金：新乡市重点科技攻关计划项目编号:ZG14006

在线出版日期：2015-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：903-906