含MYND结构域的锌指蛋白10的原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要：

目的 表达纯化含MYND结构域的锌指蛋白10(ZMYND10)的重组蛋白并制备其大鼠多克隆抗体.方法 全基因合成ZMYND10基因的开放阅读框,构建原核表达载体pET-28m-ZMYND10.在大肠杆菌中诱导表达His-ZMYND10,利用His标签镍柱纯化His-ZMYND10重组蛋白,并用泛素样蛋白酶1除去重组蛋白的His标签.用纯化蛋白免疫大鼠,蛋白A/G混合琼脂糖纯化血清得到抗体.通过Western blot和免疫沉淀方法鉴定抗体的特异性.结果 成功构建原核表达载体pET-28m-ZMYND10,并获得可溶性表达.利用His柱得到高纯度的重组ZMYND10抗原,免疫大鼠后纯化得到的ZMYND10多克隆抗体可以检测到B16F10细胞中过表达及内源性表达的ZMYND10蛋白,并可用于免疫沉淀实验.结论 本实验成功制备了ZMYND10的多克隆抗体,为后续探索ZMYND10在肿瘤细胞中的功能奠定了基础.

关键词：锌指蛋白10、多克隆抗体、纯化

所属期刊栏目：32

分类号：Q51(蛋白质)

资助基金：河南省高等学校重点科研项目编号:15A180010

在线出版日期：2015-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：821-825