电穿孔转染法与脂质体转染法对K562和HepG2细胞转染效率的影响

摘要：

目的 通过对电穿孔转染法和脂质体转染法在K562、HepG2细胞中的转染效率比较,探索最佳的细胞转染方法和条件.方法 以K562、HepG2细胞为研究对象,采用电穿孔转染法和脂质体转染法分别转染带有绿色荧光的质粒PEGFP-N1和无荧光的质粒pCDNA3.1、pCDNA3.1-EOS基因,荧光显微镜下观察PEGFP-N1转染效果,计算转染效率;收集各培养组细胞,裂解后提取蛋白,采用Western blot方法检测基因转染后的蛋白表达.结果 当脉冲20 ms、电阻90 Ω、电压150 V时进行电穿孔,转染质粒PEGFP-N1,K562细胞可以得到较高的转染率;当脉冲20 ms、电阻90 Ω、电压250 V时,转染质粒PEGFP-N1,HepG2细胞可以得到较高的转染效率.在K562细胞和HepG2细胞中,电穿孔转染法的转染效率均显著高于脂质体转染法(P＜0.05).电穿孔转染法转染PEGFP-N1后K562细胞和HepG2细胞的存活率显著低于脂质体法(P＜0.05).Western blot结果显示电穿孔转染法蛋白表达量高于脂质体转染法(P＜0.05).结论 最佳条件下电穿孔转染法是一种高效的基因转染方法,对比较难转染的悬浮细胞效果更佳.

关键词：电穿孔、脂质体转染、K562细胞、HepG2细胞

所属期刊栏目：32

分类号：Q813.1(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金项目编号:31301135,河南省教育厅科学技术研究重点项目编号:14B320015

在线出版日期：2015-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：698-701