小鼠脂肪源间充质干细胞的培养鉴定及增强绿色荧光蛋白-慢病毒载体转染
目的 探索脂肪源间充质干细胞(A DMSCs)的分离培养方法、生长特性及筛选出慢病毒载体感染间充质干细胞的最佳感染指数(MOI),并鉴定其感染后的增殖能力,为ADMSCs移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据.方法 取4周龄昆明小鼠腹股沟脂肪组织,差速贴壁法培养分离昆明小鼠脂肪源间充质干细胞.经细胞培养液洗涤、离心后接种于细胞培养瓶,放置体积分数5％ CO2孵箱中培养,24h后换液,以后每3d更换培养基,待细胞融合达到约90％时,传代培养.取第3代ADMSCs用流式细胞术(FCM)检测其表型、茜素红染色及油红O染色鉴定其多向分化潜能;用携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒载体(LV)感染ADMSCs,FCM检测病毒感染效率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测感染后的细胞活力.结果 (1)差速贴壁法培养分离7～11d时细胞融合达80％以上.原代细胞融合达80％～ 90％进行1:4传代,细胞贴壁和生长速度快于原代细胞培养.第3代及再传代细胞形体趋于一致,细胞呈梭形.细胞连续传代10次,生长速度未见明显减缓;(2) FCM检测第3代细胞CD29阳性表达98.93％,CD34阳性表达0.17％;(3)第3代细胞成脂诱导14 d油红O染色阳性,成骨诱导14 d茜红染色阳性;(4)当MOI=25感染第3代细胞72 h后,共聚焦荧光显微镜观察细胞EGFP阳性表达60％ ～ 70％,细胞活力不受影响;(5) MTF法显示重组慢病毒转染细胞与未转染慢病毒细胞比较,细胞增殖能力无差异.结论 从昆明小鼠腹股沟脂肪组织中分离的ADMSCs可在体外稳定传代;差速贴壁法可以简便、高效地提取ADMSCs;携带EGFP的LV可有效感染ADMSCs,并且感染后其增殖能力不受影响.
脂肪源间充质干细胞、原代细胞培养、生物学特性、慢病毒转染、小鼠
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R394.2
河南省2011年科技发展计划项目112102310210;河南省教育厅2011年自然科学研究计划项目2011B320010;新乡医学院省级重点学科开放课题ZD200909
2013-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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