黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72在毕赤酵母中的克隆、表达及理化性质

摘要：

目的 通过对黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72进行基因克隆、表达,获得目的蛋白并分析该蛋白在不同条件下的理化性质.方法 聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因afp72,克隆到pUCm-T载体中测序并保存.双酶切法将afp72基因定向重组到毕赤酵母表达载体pPIC9K中.将重组质粒转化入毕赤酵母GS115,筛选出重组菌株.用甲醇诱导目的蛋白表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染鉴定.用细菌抗冻法检测抗冻蛋白在不同酸碱条件下的活性,及经100℃不同热处理时间下的抗冻活性.结果 PCR扩增获得目的基因片段afp72,克隆质粒pUCm-T与afp72重组获得了质粒pUCm-T-afp72.成功构建了真核表达载体pPIC9 K-afp72,抗冻蛋白TmAFP72经诱导后获得表达.TmAFP72在较广的pH范围和较高的温度内均具有稳定性.结论 真核表达载体pPIC9 K-afp72成功构建,并表达出目的抗冻蛋白TmAFP72,为扩大生产规模及深入研究该抗冻蛋白的性质和应用奠定基础.

关键词：抗冻蛋白、真核表达、毕赤酵母,抗冻活性

所属期刊栏目：30

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2013-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：794-797,800