干扰转酮醇酶的短发卡RNA表达载体的构建与筛选
目的 筛选出干扰小鼠转酮醇酶(TK)的短发卡RNA(shRNA)表达载体.方法 针对TK基因序列设计4条TK干扰序列:hMGFP-shRNA1、hMGFP-shRNA2、hMGFP-shRNA3、hMGFP-shRNA4,Pst Ⅰ酶切鉴定其序列.然后利用质粒转染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,用逆转录-聚合酶链式反应和酶活性方法检测转染TK shRNA后Hepa1-6细胞内TK mRNA和蛋白表达变化.结果 经酶切凝胶电泳证实shRNA载体构建正确,质粒筛选实验表明hMGFP-shRNA1质粒对TK基因的抑制作用最强.结论 成功构建表达靶向TK的shRNA重组质粒载体.
转酮醇酶、短发卡RNA、RNA干扰
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R34(人体生物化学、分子生物学)
国家自然科学基金面上项目30870871
2011-12-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
406-409