Ku70基因RNA干扰载体的构建及干扰效果鉴定

摘要：

目的 构建靶向Ku70基因的RNA干扰(RNAi)表达载体并进行RNAi效果鉴定.方法 设计3个针对Ku70基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染Hela细胞系.在转染24、48、72 h后,通过免疫印迹分析检测Ku70蛋白的表达量.把RNAi效果最显著的siRNA设计成短发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA),克隆入pSilencerTM 4.1-CMV hygro载体,转染Hela细胞系并筛选稳转细胞株,在mRNA和蛋白水平,评估Ku70 siRNA的干扰效果.结果 siRNA转染Hela细胞24、48 h后,Ku70蛋白的表达没有显著变化,但在72 h后,蛋白的表达量显著下降.在具有稳定表达siRNA的稳转细胞株中,Ku70基因的表达在mRNA水平和蛋白水平都受到了非常明显的抑制.结论 成功构建靶向Ku70基因RNAi载体,并筛选出效能最优序列,为进一步研究Ku70基因的表达与宫颈癌放射治疗敏感性的关系奠定了基础.

关键词：Ku70基因、RNA干扰、短发夹RNA

所属期刊栏目：28

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2011-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：165-168