人β-微管蛋白2C蛋白的原核表达与纯化

摘要：

目的 构建体外原核表达和纯化人β-微管蛋白2C(TubB2C)蛋白.方法 通过聚合酶链反应(PCR)扩增出人TubB2C基因完整开放读码框架(ORF),并插入pGEX-6P.1载体中构建pGEX-TubB2C重组质粒.经大肠杆菌BL21转化后,用异丙醇-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导谷胱甘肽S转移酶(GST)-TubB2C融合蛋白表达,用免疫印迹(Western blot)分析鉴定表达的GST-TubB2C蛋白,并在非变性条件下利用Glutathione Sepharose 4B纯化GST-TubB2C蛋白.结果 酶切分析和DNA测序表明TubB2C cDNA完整ORF以正确的阅读框架插入pGEX-6P-1载体;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示表达的GST-TubB2C蛋白相对分子量约为78 000,Western blot结果显示该融合蛋白可被抗GST抗体特异性识别.纯化后的GST-TubB2C蛋白纯度约90%.结论 TubB2C蛋白可在体外大量表达和纯化.

关键词：人β-微管蛋白2C基因、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：26

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30670808

在线出版日期：2009-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：220-224